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1、試劑配制及保存

緩沖劑 6包每包加510mL蒸餾水或純凈水溶解,常溫存放。

顯色劑 3瓶每瓶加10.5mL緩沖液溶解，4℃冰箱保存，每份加100μL。

底物 10瓶每瓶加3.1mL蒸餾水或純凈水溶解，4℃冰箱保存，每份加100μL。

膽堿酯酶 10瓶不用配制，直接取用 4℃冰箱保存，每份加100μL。

酶活力空白對照1分鐘吸光度變化值(ΔΑ0)在0.15-0.3之間。

2、樣品提取

取2g果蔬樣品（塊莖類取4g）剪成1cm左右見方碎片，放入小燒杯（或取樣瓶）中；加入10mL緩沖液，振蕩1～2min，倒出提取液，靜置2min待測。

3、測試

對照測試：于專用反應(yīng)瓶中加入2.5mL緩沖液，再分別加入100μL顯色劑和酶液，混勻，37℃下放置15min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，放入測試通道，按儀器“對照”鍵測試3min的吸光度變值ΔΑ0。

樣品測試：于專用反應(yīng)瓶中加入2.5mL待測樣品液，再分別加入100μL顯色劑和酶液，混勻，37℃下放置15min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，放入測試通道，按儀器“樣品”鍵，測試3min的吸光度變化值ΔΑt。

結(jié)果判定：

◇ 以分光光度計測試時，按以下表達式計算出抑制率：抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt)/ΔΑ0]×100

◇ 以農(nóng)殘檢測儀檢測時其抑制率一般可自動計算。若樣品抑制率≥50%，表示被測果蔬農(nóng)殘超標，為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需做2次以上重復(fù)檢測，多次檢測仍呈陽性需用氣相色譜等儀器做進一步確認。

操作提示：

在加底物的環(huán)節(jié)中，可預(yù)先將底物加入比色杯，待靜置時間一到，馬上將反應(yīng)瓶中的反應(yīng)液倒入已經(jīng)加有底物的比色杯，并迅速放入測試通道進行測試。這樣可以減少同時檢測多個樣品時因加底物時間過長而造成的誤差。

4、注意事項

酶活性要求：本試劑盒中酶試劑正常活性ΔΑ0≥0.3，符合GB/T 5009.199-2003方法的要求。

保存：試劑盒應(yīng)保存4℃冰箱，保質(zhì)期12個月。

使用：任何試劑使用時，用一瓶打開一瓶，用完后才使用新的，防止變質(zhì)。

器具專用原則：任何用于移液的器具和容器都應(yīng)各自貼上標簽，單獨使用，以免交叉污染。

試劑只出不入原則：測試時，從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。

環(huán)境溫度對測試的影響：當(dāng)環(huán)境溫度過低時（一般低于20℃）,測試時需作必要保溫措施。

常溫方法：本試劑可用常溫方法測試，測試時試劑室溫放置10min，測試1min的吸光度變化值ΔΑ0。正常活性ΔΑ0在0.15~0.3之間。